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        基因突變實驗

        時間:2019-10-09 10:00:41 文章來源:中化所 TAG: 點擊::

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        基因突變實驗去哪里做?中化所可做各類基因突變試驗,獨立的生物學檢測中心,包括各細胞基因突變試驗等,出具第三方基因突變實驗檢測報告。

        檢測范圍

        體外哺乳類細胞基因突變實驗,化妝品基因突變實驗,小鼠淋巴瘤基因突變實驗,酵母菌基因突變實驗,

        基因突變實驗

        野生型質粒構建

        1.引物設計:根據需要驗證的基因序列,設計需要擴增的基因片段引物。

        2. 線性化質粒:將原始的質粒載體,比如 pcDNA3.1 質粒,選擇合適的酶切位點,比如 NheI/KpnI 進行酶切,獲得線性化的質粒。

        3. 質粒連接:將線性化的載體與目的基因的連接,推薦在 10~20μl 反應體系中進行連接反應,可以選擇 T4 酶進行黏性末端的連接。

        4. 轉化涂板:將連接產物轉化到受體菌中(一般為 DH5a),涂板,培養過夜。次日,挑取平板上單克隆菌落進行搖菌, 送菌液測序,得到野生型質粒。

        突變型質粒構建

        在得到野生型質粒之后,下一步就是對目的基因片段進行突變啦,即將目的基因上面的一個堿基或多個堿基換成另外的堿基。

        1.突變引物設計: 向質粒進行單點或者多點突變,只需要設計一對引物,進行 PCR 的擴增,替換掉野生型基因的突變位點堿基。

        2.突變質粒的擴增:突變質粒的擴增過程中,需要選用高保真酶 Pfu 酶進行質粒擴增, 防止引進新的突變。通過 PCR 過程,突變型質粒也得到了擴增。

        3. 得到 PCR 產物后,將產物立即置于冰上,然后在 PCR 反應體系中加入 1 微升 Dpn I,混勻后 37℃孵育 1-2 小時。DpnI 能夠識別甲基化位點并將其酶切。從大腸桿菌里提取原始質粒模板一般都被甲基化的,DpnI 可以將原始野生型質粒模板進行酶切, 而質粒擴增的突變型質粒不能被酶切從而保留下來。

        4. 最后,將酶切后產物轉化入大腸桿菌,通過涂板挑取單克隆菌落后,搖菌測序,這樣就可以得到突變基因的質粒啦。

        檢測標準

        《化學品:體外哺乳動物細胞基因突變試驗方法(GB/T 21793-2008)》

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