基因突變實驗

基因突變實驗去哪里做?中化所可做各類基因突變試驗，獨立的生物學檢測中心，包括各細胞基因突變試驗等，出具第三方基因突變實驗檢測報告。

檢測范圍

體外哺乳類細胞基因突變實驗，化妝品基因突變實驗，小鼠淋巴瘤基因突變實驗，酵母菌基因突變實驗，

野生型質粒構建

1.引物設計：根據需要驗證的基因序列，設計需要擴增的基因片段引物。

2. 線性化質粒：將原始的質粒載體，比如 pcDNA3.1 質粒，選擇合適的酶切位點，比如 NheI/KpnI 進行酶切，獲得線性化的質粒。

3. 質粒連接：將線性化的載體與目的基因的連接，推薦在 10~20μl 反應體系中進行連接反應，可以選擇 T4 酶進行黏性末端的連接。

4. 轉化涂板：將連接產物轉化到受體菌中(一般為 DH5a)，涂板，培養過夜。次日，挑取平板上單克隆菌落進行搖菌, 送菌液測序，得到野生型質粒。

突變型質粒構建

在得到野生型質粒之后，下一步就是對目的基因片段進行突變啦，即將目的基因上面的一個堿基或多個堿基換成另外的堿基。

1.突變引物設計: 向質粒進行單點或者多點突變，只需要設計一對引物，進行 PCR 的擴增，替換掉野生型基因的突變位點堿基。

2.突變質粒的擴增：突變質粒的擴增過程中，需要選用高保真酶 Pfu 酶進行質粒擴增, 防止引進新的突變。通過 PCR 過程，突變型質粒也得到了擴增。

3. 得到 PCR 產物后，將產物立即置于冰上，然后在 PCR 反應體系中加入 1 微升 Dpn I，混勻后 37℃孵育 1-2 小時。DpnI 能夠識別甲基化位點并將其酶切。從大腸桿菌里提取原始質粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以將原始野生型質粒模板進行酶切, 而質粒擴增的突變型質粒不能被酶切從而保留下來。

4. 最后，將酶切后產物轉化入大腸桿菌，通過涂板挑取單克隆菌落后，搖菌測序，這樣就可以得到突變基因的質粒啦。

檢測標準

《化學品:體外哺乳動物細胞基因突變試驗方法(GB/T 21793-2008)》